本帖转自：http://biosky.haotui.com/thread-12071-1-2.html 作者：walkundersky; a, d8 Z. p. }0 ?+ o8 `! `
) G0 s4 d# i& i8 v" T, m聚合酶链反应(PCR)自发明至今的20年来，经过不断的开发和改进，现在已经广泛应用在诸多领域，是分子生物学、临床诊断、法医检验等实验室的常规技术。( u; l3 k1 K- m/ V( G
本书是美国冷泉港实验室出版社PCR Primer：A Laboratory Manual第二版的影印本，是第一版的全面更新和升级。本书由从事PCR研究的专家们共同研讨和撰稿，是一部最新、最权威的PCR技术实验手册。其内容从最简单的PCR操作到最新的技术改进，从最基本的PCR技术到各种奇思妙想的PCR应用技巧，无所不至，令读者目不暇接、备受启迪。具体内容包括PCR 导论、样品的制备、引物设计、PCR产物检测(定量和分析)、RNA样品的PCR、PCR介导的克隆、PCR法制备突变体、其他扩增技术等。每个操作都配有疑难解析和完整的参考文献以供答疑、检索。
1 s+ Z% F$ T8 Z( q$ v% | 本书是《分子克隆实验指南》的姊妹篇，可供从事分子生物学、遗传学、细胞生物学、生物化学以及医学各个领域研究的科研与教学人员参考，既是实验室必备的工具书，也是研究人员开阔眼界、拓展思路的不可不读之经典。 q( w6 H% V, x$ C+ W. L$ o: b
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目录" } t& a) b4 v: s# S! |/ J. n
第1篇 PCR导论9 o2 v* y: B, _& p* c
1 建立一个PCR实验室- N3 j* h6 P: M; g4 L/ G' ^
2 PCR残留污染的处理:一种酶学策略: U' D6 z; [& D, f* R5 O! }
3 高保真PCR酶# g, C8 G" p d# ~/ h4 Z) W
4 PCR的最优化和常见问题解析0 \9 } O* M7 b Q: K
5 富含GC片段的PCR扩增
* W6 e: J6 p4 M- {* [8 I8 n$ I6 精确扩增大片段的技巧
8 B! G0 i$ \' N7 PCR引物设计* i$ S3 O/ t) q( c
8 PCR扩增DNA的非放射性循环测序2 p# q$ d! P. S1 Q, D5 g4 q
第2篇 样品的制备
4 L( \* W" a2 M) K0 `1 {- d9 DNA的纯化; L' f4 {2 j# Q+ p6 S0 Z: q
10 RNA的纯化) i5 y8 Z l: B- Y2 p- Y3 @7 g
11 激光捕获微分离技术原位定位基因表达6 c1 S8 J, j" H5 l# L3 {& J( p* q0 n
12 克服PCR受抑制的策略
' C( p! T+ V' ^2 |2 R( V$ ^第3篇 RT-PCR方法
1 N+ t/ x* ~2 n# O4 f% }/ J+ L5 J13 相对定量RT-PCR和竞争定量RT-PCR内对照的使用
1 P0 c$ i* o0 n/ W! E14 四种实时PCR检测系统的比较:Bio-Rad I-Cycler、ABI、7700、Roche LightCycler、the Cepheid Smartcycler0 U2 z& ^+ j1 Y: k; d$ S
15 定量PCR的新技术
7 {9 g" r! x& X: ^/ n16 RNA的扩增:用镁激活的热稳定DNA聚合酶进行高温反转录和DNA扩增
2 V; v t1 B8 a. J" J/ R第4篇 PCR产物的检测:专门应用! J7 S5 r# _, C9 `1 U( O
17 杂合性的丢失:一种鉴定肿瘤基因组上染色体区段缺失的多重PCR方法" `) [7 r' l' q8 e
18 单链构象多态性分析6 Z$ z. x& F6 R, G( j
19 逆转录酶原位PCR
# r Z* h6 @+ L7 G7 W! x20 灵敏快速的突变检测方法——错配位点的固相化学切割法# C( q' e5 `, D- E9 ]0 Z
第5篇 用PCR分析基因的差异表达
5 O5 ]- r" k$ \+ p& ~7 u21 PCR在基于微阵列的基因表达分析中的应用
/ S: a* `- F! V3 P [* O E22 利用抑制性消减杂交技术鉴定差异表达的基因 j- F, O* j! n( k x& ^% u( Q% I3 e& A
23 基因表达分析中的荧光mRNA差异显示技术' ?7 e9 X5 c4 }+ c
第6篇 用PCR进行克隆, \4 \4 z8 e- F: G0 Z
24 以PCR为基础的文库筛选方法
2 V% M5 s5 ^& r9 [( J* e5 H25 经典RACE(cDNA末端快速扩增)法的改进6 k8 o* N( s8 a2 w G1 C$ m/ h
26 用PCR合成和分析DNA文库0 n1 L2 T. y- b
第7篇 PCR产物的克隆
- I" Y6 B9 L7 t; T5 W! N$ d1 o27 克隆PCR产物的策略8 j1 o6 _3 M% |. ?8 ?6 F8 o/ H
28 PCR产物双向和定向克隆' q: `% p% l5 @4 i2 `/ q$ G
29 核糖克隆:用含有一个核糖核苷酸末端的PCR引物进行DNA克隆和基因构建
8 e% ]* ~) e) `7 w第8篇 利用PCR进行诱变1 r0 o3 |" Y& C: _
30 诱变PCR8 j0 t5 D& X/ `0 s K
31 快速PCR定点突变
' X; ~: l+ @$ g6 j- ^5 _32 利用PCR来突变和合成新的重组基因& u; |& W6 R) _' h4 ?
33 流线型基因装配PCR
3 H2 I% Q+ R N4 ~# u8 X附录1 专利/ m! _9 V8 ]8 ^8 G0 m
附录2 在PCR中使用的寡核苷酸的修饰
% U/ ~/ Q! [' G# @- J0 M/ W2 y附录3 注意事项
# f+ S# x' @8 R) J6 R附录4 供应商& b2 o$ C9 H5 ?2 F
索引9 t9 J) F- B9 Y4 b4 D0 \; a
7 [2 W; x/ V( w) u2 _( C5 ]+ N' n" _, q; _# E' z
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