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本帖转自：http://biosky.haotui.com/thread-1273-1-1.html 作者：hantavirus
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朱厚础 等译，1999年7月出版，ISBN 7-03-007186-7/Q.837，- U; X0 x6 N# r/ i8 P
Strategies for Protein Purification and Characterization:A Laboratory Course Manual，D.R.Marshak, J.T.Kadonaga, R.R.Burgess,M.W.Knuth，Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1996
3 U9 g% ?& r1 a+ Z0 `2 p7 T5 i- ?# @- v
为适应生命科学发展的需要，自1989年以来，著名的美国冷泉港实验室每年举办一期“蛋白质纯化与鉴定研习班”，本书既是在其讲稿的基础上写成的。全书分4个单元，分别以钙调蛋白、转录因子AP-1、重组σ32和胰岛素受体为例，从不同的原材料出发，通过一组具有代表性的并经多年优化的纯化和鉴定实验，具体地介绍现代生物学和医学实验室中一系列常用的蛋白质纯化与鉴定技术；对每个实验均详细叙述其材料设备、试剂配置、操作程序和注意事项等。书后附录对若干重要的通用技术做了补充介绍。1 J4 G6 M _' U) C7 c: `! P
( }( k* f. o2 P; m
目 录
% n# N$ w. o6 J7 G7 S4 Q$ i }9 K2 \) b序
7 {$ \4 ^$ b( O, y; j前言8 ^" B+ d) {- f+ q) k
绪论 16 M P6 y& o, P
一、能用作纯化依据的蛋白质性质 1
' L" V! _, ^9 g% \二、分子相互作用的类型及其影响因素 57 N7 {, V" e* N' v* o1 Q B
三、分离方法的类型 61 N9 M# ` H3 ?% ~2 C c6 }- u
参考文献 7
& {$ C5 R x8 M$ |/ B6 }如何使用本指南 9
5 p+ J0 {/ i) y# t; [! M第1单元 钙调蛋白的纯化 Daniel R. Marshak 11+ X2 t' W" h- ~5 ~$ a- B# L
实验1 活性测定：钙调蛋白组分的活性测定 19, ~3 ]4 v! `1 j( N J( B: n5 E
实验2 组织提取物的制备 24
: r. B) r1 I+ O# _实验3 粗分级分离 32
- o) Y7 d1 G% C- W: S实验4 离子交换层析 39
2 s; ]3 Y" l8 J( f6 q' l5 v6 R实验5 疏水作用层析 46
* B4 c6 P9 @5 }6 t& H2 u实验6 钙调蛋白的鉴定：收率的计算 51
1 z; v s, ]. }0 w& e& n实验7 钙调蛋白的鉴定：电泳 53; @, p$ }, Q+ `) ?$ M( K
、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 53
6 B) }! _+ c! l% `二、无法垢剂的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 54
- x- h5 i. F" Z5 m, H. A三、尿素梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳与折叠分析 56
9 q& }+ Q; h+ Q* e实验8 蛋白质的裂解消化 59
8 E8 a. K! a r; c. q% J一、钙调蛋白的溴化氰裂解 63 y1 g- Y1 n# H+ W5 A! N" [$ k" A
二、钙调蛋白的胰蛋白酶消化 64
; q m( S& }# U; L+ {实验9 反相高效液相色谱 66. K) D) w( M5 R" P0 x! O
实验10 钙调蛋白的物理分析 708 T9 a+ n4 o9 M5 y
一、紫外吸收光谱 70
6 U; L V7 O E# ]0 o% \4 T8 {( o二、蛋白质和肽的质谱 71
: x; S) I- \+ J实验11 钙调蛋白的化学分析 752 K+ G* s4 _+ [+ V( }$ l
一、氨基酸分析 75
& o N k6 S: P$ K- J* v- _/ n二、序列分析 76
- V6 z0 u4 J4 W' C& G试剂的配制 82
: n. L0 F$ M7 t# {! Q第2单元 Hela细胞转录因子AP-1的纯化 James T. Kadonaga 899 x5 e& Q% _, ~4 C/ T
实验1 Hela细胞核提取物的制备 917 f! S! h5 }& _+ g/ E7 e9 W
实验2 Sephacry S-300 HR凝胶过滤层析 94
/ f- l# d- W; j+ o" M- q, Z! t+ Z; D. d9 [" [& I2 l3 g
( r; \3 B8 {7 z+ N. ]
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, Z- Q0 B# a4 ?, a$ @0 ~/ M* ^& o2 }5 X. y% A' h/ {! E! L
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