关于his标签纯化蛋白的问题

病毒云 · 发表于 2016-4-13 17:56:34

本帖最后由病毒云于 2016-4-13 17:59 编辑

采用pet43a表达蛋白，带10个his tag，蛋白在上清里，经过his纯化后，结果不尽人意，不知道坛子里谁能帮助一下。多谢了。
埃博拉核蛋白表达后进行镍柱纯化.jpg

从左到右依次为50mM咪唑洗脱，100mM咪唑洗脱， 500mM咪唑洗脱，蛋白marker，系列浓度BSA。
破解缓冲液采用的是100mMTris，50mM Nacl，pH7.6。蛋白为83kd，等电点4.9.

有人建议我再做个离子交换，可行吗？

cao1976 · 发表于 2016-4-15 08:06:14

由于你的蛋白在上清里，成分较多，我觉得过离子交换柱可能效果不见得好，试一下分子筛？
另外，如果要采用离子交换，因为你的蛋白等电点较低，可以尝试下偏酸的缓冲体系试一下离子交换？

病毒云 · 发表于 2016-4-15 15:39:10

cao1976 发表于 2016-4-15 08:06
由于你的蛋白在上清里，成分较多，我觉得过离子交换柱可能效果不见得好，试一下分子筛？
另外，如果要采用 ...

多谢老大帮助，我今天上了个分子筛，GE公司的8-200KD分离。不知道结果如何，期待中。。。。

病毒云 · 发表于 2016-4-21 16:26:29

经过分子筛后，结果如下，似乎起了点效果

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