求大片段RT-PCR老手指教

序道

小弟目前在做感染性克隆，手上有一2.2KB的片段，以病毒RNA为模板P了很多次，都没P出来，电泳结果显示只是在1KB以上到2KB左右有一大团杂带。 RT-PCR条件调整过很多次，但没有用。望各路高手指点一下，叩谢~~~






















楼主：蓝色水瓶
原帖链接：http://biosky.haotui.com/thread-24672-1-1.html

序道

使用INvitrogen公司的长片段反转录酶，PCR反应条件再进行优化可能能解决。


2#hxq78316

序道

以病毒RNA为模板先逆转录成cDNA，然后再PCR，你怎么能直接以RNA为模板进行PCR呢。
如果P不出来，你可以在1K左右位置处设计中间引物，分两次P，然后再overlap下。


3#ipsvirus