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关于病毒感染不同时间点取样的疑问

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发表于 2016-10-9 10:09:16 | 只看该作者 回帖奖励 |倒序浏览 |阅读模式
刚开始做病毒实验,有很多不太明白的地方,请高手解答。。
    实验中需要做到病毒感染后取不同时间点的感染细胞,用作磷酸化蛋白质的western,培养器皿用六孔板,需要取到0h、1h、2h、4h、8h、12h、24h、48h,操作步骤中需要将稀释后的病毒液接种到单层细胞上,37℃吸附1h,然后去病毒液,PH3.0的甘氨酸作用1min,再用pbs润洗三次,加入2%FBS的MEM培养液2ml,37℃培养。
   我有几个疑问:
1.时间点的选取是从加入病毒液开始,还是病毒吸附1h过后再开始算?
2.PH3.0的甘氨酸起什么作用的?能否省去吸附后的几个步骤,就是说可不可以在病毒吸附1h后直接加入培养液继续培养?
3.不同时间点取得样品怎么处理?是把细胞冻在-20℃等全部取样一起裂解,还是取一次就裂解一次细胞然后把蛋白定量变性,-20℃保存?感觉对样品蛋白都有一定影响的,望指教!!!
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