TCID50滴度测定

于新友

我用TCID50检测病毒浓缩液浓度，不到十天细胞都死了，请问各位有这样的情况发生吗？是我的细胞状态太差，还是培养基营养不够，或者培养箱二氧化碳浓度高了？我的培养基加了5%FBS，二氧化碳浓度为5%。培养基颜色很黄，但看不到细菌污染。
TCID50 得出的结果是最接近实际的病毒滴度吗？

sdauvet

楼主你好，你说的比较笼统，不知道你养的是什么细胞以及测定的是什么病毒，我试着说一下我的观点，希望能对你有所帮助：
1. 细胞的状态差，当然会影响实验。做测定前，要选择状态好的细胞进行铺板，一般过夜培养后就可以感染了。
2. 病毒感染后，用5%FBS来维持细胞，浓度有点大，我一般都是用1%来维持，当然这个要根据你的细胞种类以及FBS的质量来决定，你看看相关的说明书，或者问问其他的人是不是也是这个浓度。
2. 培养基的颜色很黄，而且无污染，可能是你的细胞密度比较大的缘故，我一般采用2~5*10E5来铺板。
3. 培养箱二氧化碳浓度为5%，应该没问题，这里我给你一个小小的常识，但没必要过分计较：一般的细胞系的培养基用1640、DMEM均可，1640里的碳酸氢钠是2g，因此需要5%的CO2与之平衡，而DMEM则有3.7g碳酸氢钠，因此需要10%的CO2平衡。如果用DMEM和1640 来1:1混合则需要7-8%。即使配液时pH不对，在CO2浓度合适的孵箱内也会逐渐达到pH7.2，
4. 测定病毒的滴度，要根据很多方面来选择方法，比如说针对于某一种病毒，传统上都是用TCID50来进行滴定，发表的论文都用这个方法，那么你就选择这个方法，因为有可比性，数据比较容易得到同行的认同。到目前为止，似乎还没有“某一种方法最接近于病毒的实际滴度”这一说法

笼统的回答这么多，不知道对你有没有帮助

ipsvirus

1.楼主测TCID50 为什么要测十天？什么病毒啊，我们做流感，做冠状病毒最多也就4天。十天，还5%的FBS，那细胞早就长爆了了吧。
2.要说最接近的病毒滴度那就是直接做空斑实验测出PFU，但对那些不能产生CPE的病毒来说就不能做了。所以就做TCID50，用抗体免疫染色。有个公式可以近似转化，PFU=0.7*TCID50