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标题: [转移贴]请问：为什么杆状病毒扩增不要超过P2代？ [打印本页]

作者: virology 时间: 2015-7-7 13:25
标题: [转移贴]请问：为什么杆状病毒扩增不要超过P2代？
原贴由ratking  发表于 2010-7-29 15:58
http://biosky.haotui.com/thread-15821-1-7.html

记得有两种说法：
1、代数多了，容易产生突变
   -----疑问：突变这么容易产生？几代就有这么大的积累效应
2、多角体蛋白在细胞间感染不是必须的，所以病毒有减少表多角体蛋白的趋势，当目的蛋白取代多角体蛋白后，目的基因的表达也有减少的趋势
----多角体蛋白不是组成病毒的必须成分？

以下是会员回复：
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gpj402发表于 2010-7-30 15:49 ：我试着回答下你的两个问题：
1.
我印象中记得不是说不要扩增超过2代，而是到生产那一步骤不要超过四代。这个好像是从发酵生产那里来的，还是蛋白生产的要求。还有个扩增次数增多后，病毒的特性会发生改变，这点不是说突变特别多了，而是说代系不纯，MOI也会发生改变，最终会影响蛋白表达的质量。
2.
在细胞间感染时，多角体蛋白不是必须的，所以我们目前利用杆状病毒进行蛋白表达时也是将多角体蛋白的位置进行置换。
但是，并不是说多角体基因的表达并有减少的趋势。这是由于杆状病毒感染的二元性造成的，它有细胞间的感染，也有细胞外的感染。细胞间的传播是需要BV，细胞外的传播需要更稳定的形式，在多角体蛋白的包涵体中来完成这种传播方式。
这点有些像部分细菌，生长状况好的话它就生长繁殖，生长条件不好的时候它就生长成孢子。多角体蛋白的启动子在杆状病毒的基因中属于晚期表达的基因，但是对杆状病毒的传播还是有帮助的。所以单就细胞间的传播来断言多角体基因表达减少是不恰当的。

imboy 发表于 2010-7-31 11:35 ：一般不超过3代，如果大量生产的蛋白的话，你就要大量的病毒，这个就是涉及到moi和titer的问题了。

dianhh 发表于 2010-7-31 16:15 ：我们做杆状病毒时认为虫体血淋巴来源的BV细胞传代3-4代后，可能会导致细胞来源的BV和虫体来源的BV的组成由一定差别。譬如：在AcMNPV BV中是存在FP25K的，但是经过连续细胞传代培养获得的BV的FP25蛋白的基因会发生突变（极为常见），主要解释是由于细胞培养时主要是BV负责细胞-细胞的感染，导致在没有虫体选择压力的情况下多角体产生会受到影响，主要发现的现象就是FP(少多角体)，多角体蛋白的突变没有报道，主要集中在FP25K蛋白的突变。

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