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by ms003

我去年的这个时候养过293细胞，是用来包装腺病毒的，刚开始养的时候听说这个细胞很难养，后来发现其实不然，说一下我的经验。
1. 刚开始培养我们都用胰酶消化，后来发现传代时根本不用胰酶，去掉旧培养液，加入新培养液吹打下来即可，不过这个细胞很娇贵，动作尽量轻柔。不过传代次数太多性状可能会发生改变，贴壁会较牢，反正我用了一年多，一直没用过胰酶。
2. 293不耐酸也不耐碱，但是在我养的细胞中并不是最不耐碱的，在传代时液体稍碱点问题不是很大，一般都会贴壁的。
3. 一般用10%FBS的高糖DMEM培养1：2传代时，3天左右就可以再次传代。
4. 我发现293的代数对细胞性状影响很大，一般连续传代10次后形态就改变很多，标准的293应该是多边形的，时间长了就呈类似纤维状的了，状态会越来越差，长的速度也会减慢。293细胞一般都是用来包装腺病毒的，细胞内的包装元件很重要，但是细胞代数太多里面的包装元件很容易丢失。我们一开始用本实验室保存的已经传了n代的293做转染时转染效率一直很低，包装病毒后感染靶细胞一直没荧光，也就是没包装成功，后来换了从法国带来的代数较低形状很典型的293细胞，一次就成功了。
这只是我的个人经验和意见，仅供参考，希望能给正在做的朋友一点帮助。

《293细胞的培养》：

By cyp2003
我觉得293细胞很好养，未发现脱落现象，培养基是高糖DMEM +10%胎牛血清（Gibco），80%融合时传代，一般1瓶传3瓶，次日细胞贴壁，如果脱落，多半考虑是污染（细菌或别人包装的病毒）所致。

By 华一
我也在养293细胞，我感觉不是很难养的，第一批细胞可能是冻存的时候出了问题，没有成功，第二批细胞一下就好了。我用的只是国产（成都）的小牛血清，浓度为10％，DMEM培养基里也没有另外加谷氨酰氨，只是在复苏时要耐心，刚复苏的293贴壁很慢的，我的经验是加双倍的DMEM培养基，这样DMSO就被稀释了，不必一定在24小时后换液（如果复苏细胞时没有离心的话），我是等了48小时，293才大量贴壁，然后换液，成活率较高。
当细胞只有30％－40％满瓶时（常规是80％－90%）,我发现细胞很多成团生长，分布不均匀，于是提前传代，在传代过程中，很重要的一点是胰酶消化不能过度，我加入胰酶后，只在孵箱中放置了1分钟，期间不断观察，现在细胞长的还不错。
通过比较，我也觉得，293在塑料培养瓶中比在玻璃培养瓶中长的要好些。
总之，我认为，试验最重要的，是要理解其原理，在规范操作的前提下，可以灵活运用。
至于为什么大瓶子要好些，我觉得可能是更有利于293均匀的分布，利于营养的摄取，个人之见

By Huangsiluo
没有比293更好养的细胞了，介绍以下我的程序:
培养基；GIBCO DMEM粉剂，加双抗，HEPES，NaHCO3
培养瓶；Coring
传代：倒去废液，PBS洗二次，胰蛋白酶（小瓶1ML，大瓶2ML）处理5分钟，需拍打一下。加PBS5-10ML，离心1000转3MIN，加2ML培养基重悬，取0。3毫升到小瓶，0。5毫升到大瓶。瓶子可以不丢，重复使用，就是把酶解后的瓶子用PBS洗两次。我已经重复使用2个月了。