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沙发
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楼主 |
发表于 2015-1-31 20:02:35
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二、动物的免疫5 L8 Z- y9 Z* `
; y+ {3 Z5 Q: g
选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功,获得高质量的McAb至关重要。一般要在融合前两个月左右确立免疫方案开始初次免疫,免疫方案应根据抗原的特性不同而定。% g9 E5 `: N; ~9 ^
4 d. z0 T2 E2 N. `4 P! a 1. 颗粒性抗原免疫性较强,不加佐剂就可获得很好的免疫效果。下面以细胞性抗原为例的免疫方案:3 v4 S/ r, W% }) O( q$ b5 V
初次免疫 1×107/0.5ml ip (腹腔内注射) ~& B$ ~, X: g3 Z# f2 P! k
↓ 2~3周后) S& V& S8 F/ n
第二次免疫 1×107/0.5ml ip1 ?1 Y' t. C0 `+ G }- S" ~
↓ 3周后7 p: n' }4 S% b
加强免疫(融合前三天) 1×107/0.5ml ip或iv(静脉内注射)
! R, ]- i" [9 F; ~3 O) O" Y( M' K ↓/ l" s$ Q( P) @
取脾融合
6 P3 t9 [( v5 Z& w. r; \; ~1 B9 c& u5 p" O: T, H6 ]+ [
2. 可溶性抗原免疫原性弱,一般要加佐剂,常用佐剂:福氏完全佐剂,福氏不完全佐剂。要求抗原和佐剂等体积混合在一起,研磨成油包水的乳糜状,放一滴在水面上不易马上扩散呈小滴状表明已达到油包水的状态。商品化福氏完全佐剂在使用前须振摇,使沉淀的分枝杆菌充分混匀。+ ^. D5 W! q8 ]+ I4 Q3 |
初次免疫 Ag 1~50μg 加福氏完全佐剂皮下多点注射1 `- t' a( C. D, F9 N0 y
│ (一般0.8~1ml 0.2ml/点)+ L& O% @7 D+ x5 U0 U
↓3周后
# {, o! u8 Z1 b" A 第二次免疫 剂量同上,加福氏不完全佐剂皮下或ip+ F. n( t d, \1 h' n
│ (ip剂量不宜超过0.5ml)
- I+ X7 |* M l* X. x8 a: z& A ↓3周后
$ Y+ n) R/ u9 z% W/ ~4 Z 第三次免疫 剂量同上,不加佐剂,ip* i0 C' z' E+ H; R
│ (5~7天后采血测其效价,检测免疫效果)% c! Q4 J, S' A* \, K, ?
↓2~3周后0 f: ]! Z0 E" k6 w, k+ h
加强免疫,剂量50~500μg为宜,ip或iv
$ c6 P' X: ]" o! W! U9 O) P ↓3天后+ Q+ i( S5 x4 F- F3 K$ n/ N
取脾融合- m' I; s' A& q) @
( |% s: Z8 t6 }6 r
目前,用于可溶性抗原(特别是一些弱抗原)的免疫方案也不断有所更新,如①将可溶性抗原颗粒化或固相化,一方面增强了抗原的免疫原性,另一方面可降低抗原的使用量。②改变抗原注入的途径,基础免疫可直接采用脾内注射。③使用细胞因子作为佐剂,提高机体的免疫应答水平,促进免疫细胞对抗原反应性。 |
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