CRISPR-Cas9也能用于嗜热菌基因组编辑
在本研究中，作者利用spCas9成功在芽孢杆菌ET138（Bacillus smithii ET 138/ET 138）中运用，该菌生长温度较宽，可在37°到65°温度之间生长。经过实验测得，spCas9在ET 138体内只有在37°的情况下才会作用，而当温度达到42°以上时，spCas9在ET 138体内是没有切割活性的，于是利用这一点作者形成了一个单质粒的CRISPR系统，该质粒上包括同源修复用的同源臂、spCas9,、sgRNA表达框，利用温度来控制spCas9的表达。基因组编辑工作首先在55度下进行，让菌液在55度条件下培养24小时，尔后每隔24小时用新鲜的培养基重新培养菌体，放置的温度从55°逐渐降到37°，然后又将温度逐渐从37°上升到55°。经过实验证明，该系统的效率为50%左右。为了提高效率和运行速度，研究者将从55°降温到37°过程的循环次数从原来的4次降到1次，在每个温度的培养时间减少到8到16小时。研究者利用这套系统，成功实现了ET 138的基因组中基因的敲除、敲入。该操作程序可在一个星期内完成基因敲除/敲入，其中包括质粒丢失的时间，该系统可实现100%基因敲除，90%基因删除，20%基因敲入。该系统适用于内源的修复系统较强且生长温度较宽。
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